Sắc cam kết là gì? Đây là một kỹ thuật phòng thí nghiệm dùng làm phân tách các chất thoát khỏi hỗn hợp dựa vào sự phân bố liên tục của chúng giữa hai pha, trong những số đó một pha không hoạt động và một pha hoạt động dịch chuyển sang pha tĩnh theo một phương hướng duy nhất định. Cùng Viet
Chem tìm nắm rõ hơn cách thức này qua nội dung bài viết sau nhé.
Bạn đang xem: Các phương pháp sắc ký
Tổng quan tiền về sắc đẹp ký
1. Sắc cam kết là gì?
Sắc cam kết là một phương thức phân bóc mà trong đó các nhân tố cần tách sẽ được phân bổ giữa nhị pha. Một trong những hai trộn này được gọi là trộn tĩnh cùng pha còn lại là trộn động, vận động trên trộn tĩnh theo hướng xác định. Thành phần tất cả hổn hợp tự phân bố lại thân hai pha bằng việc thông qua quá trình có thể là hấp thụ, phân vùng hay đàm phán ion hoặc các loại trừ, kích thước. Pha tĩnh sinh hoạt đây hoàn toàn có thể là hóa học rắn hay chất lỏng, còn trộn động hoàn toàn có thể là chất lỏng, khí hay chất lỏng rất tới hạn.
Hiểu một giải pháp khác, sắc đẹp kí chính là một nhóm các kỹ thuật phòng thí nghiệm dùng làm phân bóc tách những thành phần của một lếu láo hợp bằng việc trải qua hỗn hợp sang một giai đoạn tính. Thông thường, mẫu sẽ tiến hành lơ lửng trong trộn lỏng hoặc khí với được bóc tách ra hay khẳng định dựa trên cách chúng chảy qua hoặc xung quanh một trộn lỏng hay rắn.
Sắc ký là gì?
2. Lịch sử vẻ vang phát triển
Kỹ thuật sắc ký được sáng tạo vào năm 1903 bởi nhà thực vật người Nga Mikhail Tsvet lúc ông vẫn tiến hành phân tích về Chlorophyll.Sau đó, Thompson thuộc Way đã nhận ra đầy đủ đặc tính trao đổi ion của đấtĐến năm 1935, Adams và Holmes đang quan ngay cạnh thấy phần đa đặc tính hiệp thương ion trong trang bị đĩa nghiền. Tự đó, mở ra lĩnh vực sẵn sàng cho nhựa hội đàm ion.Khái niệm về sắc ký kết khí – lỏng được Martin và Synge giới thiệu lần trước tiên vào năm 1941.Kỹ thuật nhan sắc kí cải cách và phát triển mạnh trong suốt ráng kỷ 20. Các nhà nghiên cứu đã nhận được thấy nguyên tắc căn nguyên của sắc lý Tsvet có thể được áp dụng với các phương pháp khác nhau, tự đó cho ra nhiều các loại sắc ký kết khác nhau. Đồng thời, nghệ thuật trong tiến hành sắc ký kết cũng văn minh liên tục và được cho phép việc phân tích những phân tử tương tự như nhau.
3. Sắc ký kết được thực hiện với mục đích gì?
Sắc kí được sử dụng đa số trong bóc các nhân tố của một các thành phần hỗn hợp giúp khẳng định hoặc tích lũy chúng. Đây được xem như là một kỹ thuật chẩn đoán bổ ích hoặc một trong những phần trong một kế hoạch thanh lọc.
Sắc cam kết được thực hiện để tách bóc thành phần của một hỗn hợp,...
Một số thuật ngữ tương quan đến sắc đẹp ký
Chất đối chiếu là những chất rất cần phải tiến hành tách bóc trong quy trình sắc ký. Bọn chúng thường là đều chất cần thiết phải lấy tất cả hổn hợp ban đầu.Sắc ký phân tích được dùng nhằm khẳng định sự tồn tại và nồng độ của hóa học phân tích vào mẫuPha liên kết đó là pha tĩnh được liên kết cộng hóa trị cùng các hạt cung cấp hay thành trong của ống cột.Sắc ký kết đồ là áp ra output trực quan của sắc kí. Trong trường hợp phân bóc tách tối ưu, những đỉnh xuất xắc mẫu khác biệt trên sắc cam kết đồ sẽ tương ứng với phần lớn thành phần khác nhau của tất cả hổn hợp được tách.Thiết bị cho phép thực hiện tại phân bóc tinh bi như sắc cam kết khí hay bóc tách sắc cam kết lỏng được hotline là máy sắc ký.Dịch cọ giải là một số loại dung môi mang chất phân tích trực thuộc pha động rời ra khỏi cột với chúng rất có thể được call là nước thải.Elite là hóa học phân tích, hòa tan
Eluotropic là 1 trong những danh sách gồm những dung môi được xếp thứ hạng theo sức mạnh rửa giải của chúng
Pha bất tỉnh là trộn tĩnh sẽ được cố định và thắt chặt trên mọi hạt cung cấp hay trên thành vào ống cột.Pha rượu cồn là một số loại pha di chuyển theo 1 hướng xác định. Nó hoàn toàn có thể là một chất lỏng xuất xắc khí hoặc chất lỏng rất tới hạn.Thời gian lưu chính là thời gian đặc thù để một hóa học phân tích ví dụ đi qua hệ thống (bắt đầu từ trên đầu vào cột mang lại đầu dò) trong điều kiện đã đặt.Mẫu là nội dung bắt buộc phân tích trong triển khai sắc ký. Nó gồm thể gồm 1 thành phần hay các thành phần hỗn hợp nhiều thành phần.Chất tan là các thành phần của mẫu trong sắc cam kết phân vùng
Chất có công dụng hòa tung một hóa học khác tốt nhất là pha hễ lỏng vào sắc ký kết lỏng được gọi là dung môi.Pha tĩnh là chất cố định tại địa điểm trong tiến trình sắc kí.Máy dò là một trong những loại chính sách được dùng làm phát hiện nay định tính cùng định lượng số đông chất phân tích sau thời điểm tách.
Các phương thức sắc cam kết cơ bản
1. Sắc cam kết khí
1.1. Sắc cam kết khí là gì?Pha di động là một chất khí
Mẫu so sánh được hóa tương đối tại ánh sáng cao và hoạt động nhờ gồm khí chứa trong bom khí dẫn mang lại cột phân tách nằm trong phòng điều nhiệt, quá trình phân tích những chất sẽ diễn ra ở đây
Cột sắc ký kết thường có đường kính rất nhỏ tuổi (khoảng vài ba mm) với xoắn xoắn ốc trong phòng điều nhiệt. Tùy vào pha tĩnh tín đồ ta vẫn phân ra những loại sắc ký khí khắc nhau.
Sắc kí khí thường thực hiện trong phân tích với phát hiện các chất, áp dụng cột sắc cam kết chuyên dụng. Phương thức cho ưu thế là thời gian ngắn và lượng chủng loại ít, độ chính xác cao.
Một hệ thống sắc ký kết khí trong trung trọng tâm kiểm nghiệm
1,2, Phân loạiSắc ký kết khí – rắn: pha tĩnh là chất rắn với phép tắc phân tách các chất nhờ vào nguyên lý sắc ký hấp phụ.Sắc cam kết khí – lỏng: gồm pha cồn là hóa học lỏng và hình thức phân tách bóc dựa vào nguyên tắc sắc cam kết phân bố.
2. Sắc cam kết lỏng
2.1. Sắc ký kết lỏng là gì?Có pha rượu cồn là hóa học lỏng.
2.2. Phân loại- nhờ vào đặc tính trộn tĩnh (hay hiệ tượng của quá trình phân tách):
Sắc ký hấp phụ: sự phân tách của chất là vì ái lực không giống nhau của những chất phân tách bóc đối với hóa học hấp phụ là chất rắn.Sắc ký thương lượng ion: sự phân tách bóc các ion bởi những ion được phân tách bóc trong dung dịch tất cả ái lực khác nhau so với các trung tâm thương lượng ion (với hồ hết nhóm đựng ion) trên hóa học rắn là pha cụ định. Các chất này còn được gọi là chất trao đổi ion mà thường thì nhất là nhựa hội đàm ion.
Hình hình ảnh về hệ thống sắc cam kết ion
Sắc ký kết lọc gel tốt sắc ký sàng phân tử bên trên cơ sở gia công bằng chất liệu hạt gel xốp với size hạt gel cũng như lỗ hạt gel hoàn toàn có thể được tạo nên theo ý muốn. Trong quá trình sắc ký, các chất được phân bóc trên cơ sở kích cỡ và mẫu thiết kế phân tử trong mẫu mã phân tích. Những phân tử bự của pha lỏng ko qua được những lỗ gel cần sẽ di chuyển hẳn qua các khu vực trống, vì tất cả đường đi ngắn lại nên dịch rời nhanh thoát ra khỏi cột trước. Với các phân tử bé dại chui qua các lỗ phân tử gel, do lối đi vòng vào và dài hơn nên di chuyển chậm hơn.Sắc ký ái lực: pha cố định và thắt chặt là một chất giá cùng với phân tử lớn, trơ với ở trên đó bao gồm gắn một chất ái lực sinh học đặc hiệu cùng một nhiều loại cấu tử hòa tan của chủng loại phân tích. Ái lực gắn thêm sinh học hay là các phản ứng phong cách enzym – cơ chất hay phòng nguyên – phòng thể.- phụ thuộc vào hình dạng trộn tĩnh
Sắc cam kết trên giấy: gồm pha tĩnh hay là nước được duy trì tại những hạt cellulose của tờ giấy.Sắc ký lớp mỏngĐây là một phương pháp được cải biên của nhan sắc lý trên cột và sắc cam kết trên giấy. Trộn tĩnh là hóa học hấp phụ được hòa thành nhũ dịch và được trải lên phiến kính chế tạo ra một lớp mỏng, kế tiếp sấy khô nhằm hoạt hóa.
Phương pháp sắc cam kết lớp mỏng: hoạt động dựa trên sự phân bố của những chất thân hai pha, trong số đó pha cố định là hóa học hấp phụ được rải rộng lớn trên phiến kính tạo ra lớp mỏng, còn pha động là một trong những loại dung môi đam mê hợp. Lúc dung môi di chuyển sẽ khiến cho các thành phần nằm trong mẫu thử dịch chuyển. Sau thời điểm dung môi sẽ chạy xong, để cất cánh hơi hết dung môi trên sắc cam kết đồ rồi để hiện màu như vào sắc ký giấy. Hoàn toàn có thể nói, định hướng sắc cam kết lớp mỏng một phần dựa trên định hướng sắc ký kết hấp phụ và một phần dựa vào định hướng sắc cam kết giấy.
Tìm gọi về sắc cam kết lớp mỏng
Sắc cam kết cột: chất liệu để làm cho pha tĩnh sẽ tiến hành nhồi vào cột. Phụ thuộc vào loại cấu tạo từ chất tạo cột nhưng mà có tất cả những nhiều loại sắc cam kết theo nguyên tắc trên. Kề bên đó, tùy vào áp lực nặng nề trên cột trong quá trình sắc ký mà gồm thể phân thành sắc ký kết cột mở và sắc ký kết lỏng cao áp.Xem thêm: Tỷ lệ kèo hôm nay - nhận định bóng đá hôm nay, ngày mai
Trên đó là một số tin tức về sắc ký mà lại Viet
HPLC là chữ viết tắt 4 chữ cái đầu bằng tiếng Anh của phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (High Performance Liquid Chromatography), trước đó gọi là phương pháp sắc cam kết lỏng cao thế (High Pressure Liquid Chromatography).
1.Khái niệmPhương pháp sắc ký kết lỏng hiệu năng cao (HPLC) ra đời năm 1967-1968 bên trên cơ sở cải cách và phát triển và đổi mới từ cách thức sắc cam kết cột cổ điển. HPLC là một phương pháp chia tách trong đó pha cồn là hóa học lỏng cùng pha tĩnh đựng trong cột là hóa học rắn vẫn được phân loại dưới dạng tiểu phân hoặc một chất lỏng phủ lên một chất mang rắn, hay là 1 chất mang đã được biến bằng liên kết hóa học với các nhóm chức hữu cơ. Phương pháp này ngày dần được sử dụng rộng rãi và thịnh hành vì những lý do: gồm độ nhạy cảm cao, khả năng định lượng tốt, say đắm hợp bóc các hợp chất khó cất cánh hơi hoặc dễ phân hủy nhiệt.Phạm vi áp dụng của phương thức HPLC khôn xiết rộng, như phân tích các hợp chất thuốc trừ sâu, thuốc kháng sinh, các chất phụ gia lương thực trong lĩnh vực thực phẩm, dược phẩm, môi trường…2.Phân loạiDựa vào sự khác biệt về cơ chế bóc chiết áp dụng trong HPLC, tín đồ ta chia HPLC thành 4 loại:
Sắc ký kết hấp phụ tuyệt sắc cam kết lỏng rắn (adsorption/liquid chromatography). Dung nhan ký phân bố (partition chromatography). Sắc ký ion (ion chromatography). Sắc ký kết rây phân tử (size exclusion/gel permeation chromatography).Trong đó, dung nhan ký phân bổ (SKPB) được vận dụng nhiều duy nhất vì có thể phân tích được những hợp chất từ không phân cực tới các hợp hóa học rất phân cực, hợp hóa học ion có cân nặng phân tử không thực sự lớn (SKPB được tạo thành hai loại dựa trên độ phân cực tương đối giữa pha tĩnh với pha động: sắc cam kết pha thường xuyên – SKPT (normal phase chromatography) và sắc ký pha đảo – SKPĐ (reversed phase chromatography).Trong SKPT, pha tĩnh thực hiện có độ phân cực cao hơn pha động. Pha tĩnh loại này sẽ sở hữu được ái lực với những hợp hóa học phân cực. SKPT cần sử dụng để tách bóc và phân tích các hợp chất gồm độ phân cực cao với phân tử lượng dong dỏng lắm.SKPĐ là thuật ngữ để chỉ một loại sắc ký trong đó pha tĩnh không nhiều phân cực hơn pha động. Phương thức này sử dụng phân tích các hợp hóa học từ không phân cực mang đến phân cực. Số đông các hợp hóa học hữu cơ có mạch carbon dài (ít phân cực) rất thích hợp cho phân tích bởi SKPĐ. Dung môi sử dụng trong SKPĐ là những dung môi phân cực, trong đó dung môi nước vào vai trò đặc biệt quan trọng mà lại thấp tiền. Vì đó, SKPĐ được vận dụng nhiều và phổ biến hơn SKPT.3. Pha tĩnh vào sắc ký pha đảo Trong nhan sắc ký phân bố nói chung, pha tĩnh là gần như hợp chất hữu cơ được thêm lên hóa học mang rắn silica hoặc cấu thành từ bỏ silica theo nhì kiểu:
Pha tĩnh được giữ lại trên hóa học mang rắn bởi cơ chế hấp phụ đồ lý → sắc cam kết lỏng-lỏng (liquid-liquid chromatography). Trộn tĩnh liên kết hóa học với chất nền → sắc ký pha liên kết (bonded phase chromatography)Trong quá trình sử dụng, bạn ta nhận biết sắc ký kết pha liên kết có rất nhiều ưu điểm hơn sắc ký kết pha lỏng-lỏng vì chưng một số vì sao sau: pha tĩnh trong hệ sắc ký lỏng-lỏng dễ bị hòa tan bởi vì pha động đề xuất dễ bị mất non pha tĩnh trong thời hạn sử dụng cùng gây nhiễm so với hợp hóa học phân tích. Bởi pha tĩnh của sắc cam kết lỏng-lỏng dễ tan vào pha động nên bạn ta tất yêu ứng dụng phương pháp rửa giải gradient dung môi.Vì vậy, bạn ta hay chỉ xem xét loại sắc ký phân bổ pha link và đa số các loại cột sử dụng hiện thời trong sắc ký phân bố đều có cấu trúc dạng này.Bề mặt các hạt silica – Si
O2 (các hạt này còn có đường kính 3, 5 hoặc 10 µm) được xử trí (thủy phân) bằng cách đun lạnh với HCl 0,1M vào một hoặc hai ngày để tạo nên những đội Si
OH như sau (thông thường xuyên chỉ có tầm khoảng 8 µmol Si
OH/m2 bề mặt):
Sau đó mặt phẳng silica vẫn thủy phân này sẽ được cho bội nghịch ứng với các organochlorosilan để tạo thành các trộn tĩnh ko phân cực, phân cực trung bình hoặc vô cùng phân cực tùy theo nhóm R đính vào.
Thường chỉ khoảng một nửa nhóm –OH mất H+ để tạo thành HCl (tức hòa hợp chất cần phân tích khi đi qua pha tĩnh sẽ ảnh hưởng giữ lại vì chưng những lực lượng tương tác khác biệt tùy nằm trong tính chất, đặc điểm của hóa học tan cùng pha tĩnh.Trong SKPĐ, nhóm cố gắng R trong hợp hóa học siloxan phần nhiều không phân cực hoặc ít phân cực. Đó là các ankyl dây khá dài như C8 (n-octyl), C18 (n-octadecyl) còn gọi là ODS (octadecylsilan) hoặc các nhóm alkyl ngắn hơn như là C2; hình như còn có cyclohexyl, phenyl trong những số ấy nhóm phenyl tất cả độ phân cực cao hơn nhóm alkyl. Fan ta phân biệt các alkyl dây tương đối dài cho kết quả tách ổn định hơn những loại không giống nên đấy là loại được thực hiện nhiều nhất.
Tuy nhiên vị hiệu ứng lập thể buộc phải trong kết cấu của trộn tĩnh còn nhóm –OH không phản ứng, gây ảnh hưởng xấu mang lại quá trình bóc tách sắc ký kết tùy môi trường p
H phân tích.Trong môi trường quá acid (p
H Trong môi trường thiên nhiên baz (p
H > 7), bao gồm nền silic sở hữu pha tĩnh hoàn toàn có thể bị tổng hợp (Si
O2 thành silicat), hệ trái là N sút và số nhánh ghép cũng giảm, mũi rộng ra và thời gian lưu cũng hoàn toàn có thể giảm. Hiệu quả phân tích vậy nên sẽ không đủ độ thiết yếu xác.Một giữa những cách tự khắc phục hiện tượng kỳ lạ này là dùng các chất như trimethylchlorosilan Cl
Si(CH3)3 hoặc hexamethyldisilazan (ít thực hiện hơn) để ảnh hưởng với team –OH này (gọi là hiện tượng kỳ lạ end-capping). Lúc này ta sẽ có được loại cột ít liên can với hóa học phân tích tất cả tính baz (cột LC-DB của hãng SUPELCO).
Có một giải pháp khác để vứt bỏ bớt tác động của đội –OH cơ mà không cần xúc tiến với nó là thay gần như nhóm methyl của –Si(CH3)2-C18 bằng những nhóm cầm cố lớn hơn hoàn toàn như là isopropyl để phần lớn nhóm này sẽ bịt đi hồ hết nhóm –OH, cản ngăn tương tác của group –OH với chất bắt buộc phân tích.
Người ta còn ghép lên dây C18 một số trong những nhóm phân rất để tăng lên độ phân cực của dây C18, làm cột gồm khả năng tách chọn thanh lọc hơn so với những hợp chất phân cực bạo phổi (cột EPS – Expended Polar Selectivity).Ngoài sườn silica, thời gian vừa mới đây người ta có sử dụng đến nền vật liệu nhựa polystyren (Polystyren Reversed Phase – PRP) có thể chấp nhận được phân tích trong môi trường p
H từ 1 – 13. Cột này dễ áp dụng trong môi trường thiên nhiên acid cùng baz mạnh. 4. Pha rượu cồn trong sắc ký trộn đảo Pha động trong sắc cam kết lỏng nói chung yêu cầu đạt mọi yêu ước sau: Hòa tan mẫu phân tích. Phù hợp với đầu dò. Không phối hợp hay làm mòn trộn tĩnh. Bao gồm độ nhớt thấp để tránh áp suất dội lại cao. Tinh khiết dùng cho sắc cam kết (HPLC grade).
Trong sắc ký trộn đảo, dung môi trộn động bao gồm độ phân rất cao. Bên trên lý thuyết chúng ta cũng có thể sử dụng tương đối nhiều dung môi nhưng kinh nghiệm thực tế cho thấy thêm methanol (Me
OH), acetonitrile (ACN) với tetrahydrofuran (THF) là đạt được yêu mong nhất. Nước là 1 trong dung môi được mang lại vào những dung môi hữu cơ để giảm kỹ năng rửa giải.Mỗi dung môi đều đặc trưng bởi các hằng số đồ dùng lý như chỉ số khúc xạ (refractive index), độ nhớt (viscocity), nhiệt độ sôi (boiling point), độ phân cực (polarity index), độ rửa giải (eluent strength)…Trong kia độ phân rất và độ cọ giải có ảnh hưởng lớn lên tài năng phân tách của những mũi sắc ký.
Có ba thông số gây tác động lớn đến bóc các mũi dung nhan ký: số đĩa định hướng N, hệ số dung lượng K’, độ tinh lọc α . Khi sự biến hóa thành phần pha hễ không đem đến kết quả tách mũi theo yêu mong thì chúng ta phải cầm đổi thực chất pha đụng (sử dụng dung môi khác), tức biến đổi α. Đôi khi có thể phải đổi khác cả pha tĩnh.Trong vượt trình tách bóc của SKPĐ, sự can dự giữa hòa hợp chất cần phân tích và pha động phụ thuộc rất các vào moment lưỡng cực, tính acid (cho proton) hoặc tính baz (nhận proton) của dung môi.Thông thường xuyên pha rượu cồn trong SKPĐ bao gồm 1 hỗn phù hợp nước hoặc dung dịch đệm với một hoặc các dung môi hữu cơ phân cực tan được trong nước. Nước là 1 dung môi siêu phân cực cho nên nó không can hệ với đầy đủ nhóm alkyl không phân cực trong pha tĩnh, do đó nó được đánh giá như pha hễ yếu nhất với có tốc độ rửa giải chậm nhất trong tất cả các dung môi hễ của SKPĐ.Hỗn hòa hợp nước và dung môi hữu cơ thường làm tăng thêm độ nhớt dẫn tới sự việc tăng áp suất cột.
Việc chọn lựa dung môi và thành phần dung môi vào pha hễ được buổi tối ưu hóa cho mọi hợp chất yêu cầu phân tích. Thông thường, tín đồ ta áp dụng hỗn hợp dung môi Me
OH/nước trước, rồi ACN/nước tuyệt THF/nước. Với một tất cả hổn hợp chất phân tích phức tạp thì sẽ có được sự trộn lẫn của những dung môi cơ học với nước. Khi gạn lọc thì phải chọn những hỗn đúng theo Me
OH, ACN và THF với nước gồm độ rửa giải tương đồng.Thành phần pha động tất cả thể cố định và thắt chặt trong suốt quá trình chạy sắc ký (chế độ isocratic) hoặc được thay đổi theo một lịch trình đã định sẵn (chương trình gradien dung môi) để có hiệu quả bóc tốt hơn.5. Một số đại lượng cơ bản trong so sánh sắc ký5.1. Thông số phân bốCân bởi của một cấu tử X trong hệ nhan sắc ký có thể được tế bào tả bằng phương trình như sau:
Hằng số cân bằng K cho cân bằng này được gọi là tỉ lệ phân bổ hay hằng số phân bố (partition coefficient) và được tính như sau:
Với CS : mật độ cấu tử trong pha tĩnh.CM : mật độ cấu tử trong trộn động.Hệ số K tùy trực thuộc vào bản chất pha tĩnh, pha rượu cồn và hóa học phân tích.5.2. Thời gian lưu:t
R : thời gian lưu của một cấu tử từ khi vào cột mang lại khi tách ra ngồi cột.t
O : thời gian để cho chất như thế nào đó không tồn tại ái lực với trộn tĩnh trải qua cột; đó cũng là thời hạn pha động đi từ trên đầu cột cho cuối cột và còn được gọi là thời gian lưu lại chết.t
R" : thời hạn lưu thật của một cấu tử.
Với VS :thể tích trộn tĩnh
VM :thể tích pha động
Nếu k’~ 0, t
R~ t
O: chất ra vô cùng nhanh, cột không có công dụng giữ chất lại.Nếu k’ càng bự (t
R càng lớn): hóa học ở trong cột càng lâu, thời hạn phân tích càng lâu, mũi có công dụng bị tù.Khoảng k’ hài lòng là 2-5, mà lại khi so sánh một tất cả hổn hợp phức tạp, k’ tất cả thể đồng ý trong khoảng tầm rộng 1-20.5.4. Hiệu năngHiệu năng giỏi số đĩa định hướng N của cột đặc trưng cho khả năng tách bóc mũi nhan sắc ký của những cấu tử trên cột. N càng lớn, hiệu năng bóc tách càng cao. Số đĩa lý thuyết có thể đo bên trên sắc ký kết đồ. Người ta chứng tỏ được:
Với W1/2 là chiều rộng lớn mũi nhan sắc ký ở vị trí ½ chiều cao mũi (phút)W là chiều rộng lớn mũi sắc ký ở vị trí đáy mũi (phút)5.5. Độ chọn lọcĐặc trưng đến khả năng tách bóc hai hóa học của cột.
5.6. Độ phân giải:Đây là đại lượng biểu thị rõ cả ba kĩ năng của cột sắc ký: sự giải hấp, sự chọn lọc và kết quả tách. Nó được xác định qua phương trình sau:
